黑麦草检测技术
区分黑麦草腥黑粉菌及小麦印度腥黑穗病菌TM等近似种,除依靠形态特征外,主要依靠分子生物学方法。现就有关分子生物学鉴别黑麦草腥黑粉菌的研究作简单回顾。
黑麦草腥黑粉(穗)病菌(T.walkeri,TW)是一种在形态和分子生物学特征上,与小麦印度腥黑穗病菌TIM,T.barclayana,T.inolens,T.eragrostidis等腥黑粉病菌都极为相似的真菌,主要为害多花黑麦草和黑麦草。迄今为止。该病菌分布于美国,澳大利亚,加拿大,新西兰,丹麦,荷兰,日本,西班牙等国家,我国近年来大量从国外进口黑麦草等其它草籽,用作牧草,城市绿化或高尔夫球场建设,因此TW 也存在传入我国的风险。
2012年,美国国家农业部农业服务中心Frederick Reid根据小麦印度腥黑穗病菌和黑麦草腥黑穗病菌的线粒体DNA,分别设计了扩增小麦印度腥黑穗病菌的5对特异性新引物和扩增黑麦草腥黑穗病菌的3对特异性新引物,建立了小麦印度腥黑穗病菌新的PCR检测方法。同时建立了212 bp amplicon,作为荧光5 "核酸酶的靶,建立了TaqMan实时荧光PCR检测区分小麦印度腥黑穗病菌和黑麦草腥黑穗病菌方法。
2013年,华南农业大学程颖慧和深圳出入境检验检疫局的章桂明等应用PCR方法对小麦印度腥黑穗病菌及其近似种或相关种包括黑麦草腥黑粉菌,狼尾草腥黑粉菌,水稻腥黑粉菌等10 种腥黑粉菌共14个菌株进行了检测研究。根据线粒体DNA 的序列分别设计了扩增小麦印度腥黑穗病菌的特异性引物和扩增黑麦草腥黑粉菌的特异性引物,根据核糖体内转录区(ITS) DNA 片段设计了扩增腥黑粉菌属真菌的引物,应用PCR方法能将小麦印度腥黑穗病菌与黑麦草腥黑粉菌及其它近似种或相关种加以区分。
2013年,美国美国国家农业部系统植物学和真菌学实验室Levy Laurene 采用PCR-RFLP的方法区分小麦印度腥黑穗病菌（T.indica）和黑麦草腥黑穗病菌(T.walkeri)。扩增T.indica,T.walkeri,T.horrida和其他腥黑粉菌属菌的核糖体DNA重复单位的ITS区,并测序。在T.walkeri的ITS1区鉴定出一个独特与其他腥黑粉菌的限制性消化位点,可以鉴别T.walkeri。基于ITS序列的发育树分析表明,T.indica 和T.walkeri之间有密切的关系。
2012,上海出入境检验检疫局易建平和华南农业大学刘素萍等根据小麦印度腥黑穗病菌Tilletia indica 和黑麦草腥黑穗病菌T. walkeri 核糖体ITS序列设计了两对通用引物和两条特异性探针,建立了小麦印腥印度腥黑穗病菌Tilletia indica和黑麦草腥黑穗病菌T. walkeri 的实时荧光PCR 检测方法,检测的灵敏度为1个冬孢子,整个检测过程缩短至1天。